圆二色性光谱（Circular Dichroism, CD）作为研究生物大分子构象的光谱技术，因其操作简便、数据直观，在结构生物学和生物物理学领域中被广泛应用。尤其是在蛋白质、核酸等手性分子的二级结构分析、构象变化监测以及分子间相互作用研究中，CD光谱是一种不可替代的技术手段。然而，正如所有实验技术一样，CD光谱既有其显著优势，也存在一定的局限性。

一、圆二色性光谱的基本原理

圆二色性光谱是基于手性分子对左旋和右旋圆偏振光吸收差异的光谱分析技术。手性分子在与偏振光相互作用时会表现出不同程度的吸收，从而在近紫外或远紫外区域产生特征性信号。通过对这些信号的解析，科研人员可以获得目标分子的二级结构信息，例如α-螺旋、β-折叠、无规卷曲等构象比例。

二、圆二色性光谱的优势

1、快速、低样品消耗的结构分析工具

CD光谱最突出的优势之一是其快速获取结构信息的能力。与X射线晶体学或冷冻电镜相比，CD实验不需要复杂的样品制备或长时间的数据采集，只需将样品溶于缓冲液中即可直接上机检测。这一点在初步筛选蛋白质构象、验证表达蛋白折叠状态或监测结构稳定性变化时尤为重要。同时，CD光谱的样品用量极低，通常仅需几十微克蛋白质即可完成一次实验，对于样品产量有限或纯化难度大的项目极具吸引力。

2、动态监测构象变化

CD光谱的另一个显著优势在于其实时监测能力。由于CD数据采集速度快，研究人员可以在不同时间点或不同处理条件下获取样品的结构变化曲线。这种特性特别适合用来研究温度变性、pH诱导的构象改变，或小分子结合导致的蛋白质结构重塑过程。与红外光谱相比，CD对水的吸收影响较小，因而可以在生理缓冲液中直接进行实验，无需脱盐或更换溶剂，从而更真实地反映分子在接近天然状态下的行为。

3、适用于无晶体或非结构解析级别样品

对于难以结晶的蛋白质、含有无序区域的分子或动态复合体，CD光谱可以在溶液状态下进行测量，不依赖晶体或高分辨率样品。这使其成为结构生物学早期阶段的重要补充工具，可为后续结构解析和功能研究提供方向性指导。

4、可用于定量分析二级结构构成

通过与已知标准曲线的比对，CD光谱可以实现对蛋白质二级结构构成的半定量计算。结合现代算法（如CDPro、BeStSel等），科研人员可以较为准确地推测目标蛋白中α-螺旋、β-折叠等构象的比例，为结构-功能关系分析提供基础数据。

二、圆二色性光谱的局限

1、空间分辨率低，难以获取精细结构信息

CD光谱虽然能提供整体结构趋势，但其分辨率有限，难以像X射线晶体学或冷冻电镜那样获得原子级别的结构信息。它无法解析单个氨基酸的位置或识别复杂的三维构象细节，因此不能作为结构解析的唯一手段。此外，不同类型的二级结构可能在CD光谱中产生相似的信号，导致解释结果存在一定的不确定性。例如，右手α-螺旋和某些环状肽段可能在远紫外区域表现出类似的双峰吸收特征，增加了结构判定的难度。

2、数据易受外界因素干扰

CD信号非常敏感，容易受到实验条件的影响。例如，缓冲液的选择、样品浓度、离子强度、温度以及杂质的存在都可能显著改变光谱结果。某些常用的缓冲体系（如Tris、DTT）在远紫外区域具有强烈吸收，会干扰CD数据采集。此外，高浓度样品可能导致光程过短、吸收过强等问题，影响信号稳定性。这对实验设计和操作规范提出了较高要求，尤其是在多样本对比或高通量实验中，标准化流程显得尤为重要。

3、仅适用于含有手性中心的样品

CD光谱的测量原理决定了它仅对具有手性结构的分子敏感。无手性中心的分子，如多数无机离子、小分子化合物或对称构型聚合物，不会在CD中产生有效信号。因此，CD无法直接用于这些非手性体系的结构研究。此外，在复合体系中，如蛋白-药物结合或多组分混合体系，非手性组分可能掩盖手性信号，或通过诱导构象变化间接影响光谱图谱，增加了数据解析的复杂性。

4、不能独立完成复杂的结构建模

尽管CD光谱可以提供二级结构比例和构象变化趋势，但它无法提供空间三维坐标，因此不能独立完成完整的结构建模任务。它更适合作为其他结构生物学方法的补充手段，用于验证、优化或监测结构状态。在蛋白质工程、构象稳定性筛选或药物靶点验证等场景中，CD光谱可以快速反馈构象变化信息，但若要深入理解结构机制，仍需结合冷冻电镜、NMR或同位素标记等更复杂的分析手段。

圆二色性光谱是一种兼具高效、灵敏和成本可控特性的结构分析工具，适用于快速评估蛋白质等生物大分子的二级结构及其变化。当然，科研人员在使用CD光谱时需充分了解其局限性，避免单一解读或过度外推结果。百泰派克生物科技专注于蛋白组学与生物分析领域，致力于为科研人员提供前沿的技术支持与整体解决方案。我们持续关注包括圆二色性光谱在内的多种结构生物学技术，欢迎联系我们探讨更适合您科研需求的实验策略。

百泰派克生物科技特色项目

一、蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。

※服务优势：

1.采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;

6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

二、蛋白质组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

※服务优势：

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;

2.体内体外多种蛋白质标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;

5.专业生物信息学分析，分析更系统准确。

三、单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，然后用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，最后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

※服务优势：

1.技术先进，填补技术空白

采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标同时进行表征，百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。

2.分析数量大，成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从最小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。

五、生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

百泰派克生物科技七大检测平台

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等专业服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

1.公司采用ISO9001质量控制体系，专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；

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